產品英文名稱：Biotin Labeling Kit-NH2
產品中文名稱：生物素標記試劑盒- NH2

Biotin Labeling Kit-NH2 產品特性
整個標記過程僅需1個小時
整個標記過程在1支過濾管中進行
熒光標記抗體回收率高
適用于50-200 μg的IgG

Biotin Labeling Kit-NH2 產品描述
該試劑盒主要用于制備生物素標記的蛋白質，用于酶免疫分析（EIA）。NH2-reactive biotin是試劑盒的成分之一，它含有琥珀酰亞胺基（NHS），能與蛋白質或者其它分子的氨基反應。該試劑盒中包含了標記所需的全部試劑，標記過程十分 簡便。只需將NH2-reactive biotin加入到IgG溶液中，37℃培養10分鐘即可。每個IgG分子平均能夠和5-8個生物素分子結合。過量的生物素分子能夠使用過濾管將其除去。
Biotin Labeling Kit-NH2 試劑盒內容
- NH2-Reactive Biotin .......................... 3 tubes
- WS Buffer ......................................... 4 ml x 1
- Reaction Buffer ................................. 500 μl x 1
- Filtration Tube .................................. 3 tubes

標記IgG操作步驟
（1）將100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的樣品溶液加入到過濾管中。a）
（2）8,000-10,000 g離心10分鐘。b）
（3）將10 μl DMSO加入到NH2-reactive biotin中并用移液器吹打使其溶解。c）
（4）將100 μl Reaction buffer以及8 μl NH2-reactive biotin溶液加入到過濾管中，吹打使其混合。d）
（5）將過濾管放入培養箱中，37℃培養10分鐘。
（6）將100 μl WS buffer加入到過濾管中，8,000-10,000 g離心10分鐘，b）除去濾液。
（7）將200 μl WS buffer加入到過濾管中，8,000-10,000 g離心10分鐘，b）重復該步驟一次。
（8）將200 μl WS buffer加入到過濾管中吹打10-15次來回收標記產物。e）將該溶液轉移到0.5 ml試管中，在0-5℃下保存。
  a）樣品溶液的體積不應超過100 μl。如果抗體濃度低于1 mg/ml，重復步驟1和2直至總的IgG聚積量達到100 μg。如果聚積過程中濾液的體積超過400 μl，則在進行后續的離心操作前應除去濾液。
  b）如果溶液在離心后仍然殘留在膜上，可以再離心5分鐘或者適當增加轉速。
  c）NH2-reactive biotin在管子的底部，向管底加入10 μl DMSO，吹打數次使其溶解。
  d）如果IgG的量為200 μg，在步驟4時加入所有的NH2-reactive biotin溶液。
  e）并不一定要使用WS buffer來回收標記產物，可以選擇任何適合于該實驗的緩沖液來替代。

Biotin Labeling Kit-NH2 注意事項
用該試劑盒標記的蛋白質的分子量要>50,000。
在標記過程中，IgG或者biotin-IgG標記物始終在Filtration tube的濾膜上。
如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白質，如BSA或明膠時，在使用該試劑盒標記前，先要純化IgG溶液。IgG溶液能夠用IgG Purification Kits（不包含于本試劑盒中）來純化。
如果IgG溶液含有小的不溶物，離心后取上清液來進行標記。
如果長時間不使用，建議您把試劑盒中的標記試劑NH2-reactive biotin放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮氣，可以更好地保持標記試劑的活性，但請不要把其它試劑和過濾管放到-20℃冰箱中，仍請放在0-5℃冰箱中保存。

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