產(chǎn)品名稱：Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit         

產(chǎn)品貨號(hào)：Y30021

產(chǎn)品說(shuō)明：

我們的CRISPR / Cas9系統(tǒng)是介導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中基因組編輯的一種簡(jiǎn)單的，RNA可編程的方法；它可用于在hiPS細(xì)胞中產(chǎn)生基因敲除（通過(guò)插入/刪除）或敲除（通過(guò)HDR）。交付Cas9-sgRNA核糖核蛋白（RNP）復(fù)合物后，必須分離單個(gè)細(xì)胞并將其擴(kuò)增為克隆細(xì)胞系，以分離和篩選目標(biāo)基因型。傳統(tǒng)上，從作為集落生長(zhǎng)和傳代的經(jīng)過(guò)編輯的hiPS細(xì)胞建立克隆種群效率低下且耗時(shí)。通常，它會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡或過(guò)早分化。為克服這一挑戰(zhàn)，我們開發(fā)了完整的系統(tǒng)，該系統(tǒng)通過(guò)有效傳遞Cas9-sgRNA RNP復(fù)合物和hiPS細(xì)胞的單細(xì)胞克隆，將無(wú)足跡的基因編輯結(jié)合在一起。使用我們基于單層的培養(yǎng)系統(tǒng)可成功完成單細(xì)胞克隆

產(chǎn)品介紹：

人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（Human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)是一個(gè)功能強(qiáng)大的研究工具和疾病模型，因?yàn)槠渚邆湓鲋场⒆晕腋隆⒎只癁槎喾N細(xì)胞類型的能力。此外，人iPS細(xì)胞還可以再現(xiàn)細(xì)胞來(lái)源個(gè)體的疾病表型和基因型。將人iPS細(xì)胞結(jié)合基于CRISPR/Cas9的基因編輯技術(shù)，可以在同基因的細(xì)胞系中研究特定基因改變引起的功能影響，因?yàn)榛蚓庉嬤^(guò)的人iPS細(xì)胞能提供可再生的、無(wú)遺傳變異的患病細(xì)胞和健康細(xì)胞資源。

CRISPR/Cas9系統(tǒng)已經(jīng)成為一個(gè)強(qiáng)大的基因編輯工具，因?yàn)槠涓叩陌邢蛱禺愋裕庉嬓屎鸵子眯浴Ｔ摷夹g(shù)的強(qiáng)大主要源于它的簡(jiǎn)單，因?yàn)槿恐恍枰粋€(gè)Cas9核酸酶結(jié)合一個(gè)單鏈向?qū)NA（single guide RNA，sgRNA) 就可以決定靶向特異性（Jinek et al. 2012)。這種RNA編程的（RNA-programmable）方法利用了非同源末端連接(non-homologous end joining，NHEJ) DNA修復(fù)途徑的易錯(cuò)特性，進(jìn)而產(chǎn)生基因敲除(通過(guò)插入/刪除)。這種方法也可以通過(guò)同源重組（homology-directed repair，HDR)途徑被用于基因敲入。

 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的組件可以通過(guò)多種方法成功導(dǎo)入至靶細(xì)胞，包括基于載體的表達(dá)系統(tǒng)，RNA轉(zhuǎn)染, 導(dǎo)入Cas9/sgRNA核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP)復(fù)合物(Sander and Joung 2014)等。與基于載體的方法相比，直接導(dǎo)入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種快速轉(zhuǎn)入基因編輯實(shí)驗(yàn)的方法，同時(shí)脫靶效應(yīng)的可能性更小（Kim et al. 2014)。

 一旦Cas9/sgRNA RNP復(fù)合物被導(dǎo)入，為了分離和篩選感興趣的基因型，單細(xì)胞必須被分離并擴(kuò)增為克隆細(xì)胞系。傳統(tǒng)上,從基因編輯的hiPS細(xì)胞建立一個(gè)克隆群是低效的、具有挑戰(zhàn)性的和耗時(shí)的，因?yàn)閔iPS 細(xì)胞是以集落生長(zhǎng)和傳代的。通常，這會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡和提前分化。然而，Cellartis基因編輯和單細(xì)胞克隆系統(tǒng)包含一個(gè)成分確定的培養(yǎng)系統(tǒng)(由基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包被劑，和添加劑組成)，用于有效形成單細(xì)胞克隆和擴(kuò)增基因編輯后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一個(gè)基于單層培養(yǎng)的系統(tǒng)，規(guī)避了集落狀培養(yǎng)帶來(lái)的挑戰(zhàn)，允許單細(xì)胞傳代和促進(jìn)接種的單細(xì)胞存活和后續(xù)擴(kuò)增。

 Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個(gè)完整的，在無(wú)飼養(yǎng)層和成分確定條件下，用于hiPSCs有效擴(kuò)增和擴(kuò)大生產(chǎn)的系統(tǒng)。試劑盒包含了從接種單細(xì)胞至96孔板到擴(kuò)增至48孔板過(guò)程中所有必要的試劑。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

 Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643) 是一個(gè)完整的系統(tǒng)，允許通過(guò)電穿孔的方法對(duì)hiPSCs進(jìn)行有效的基因編輯以及隨后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增至48孔板。該系統(tǒng)中提供了重組Cas9蛋白質(zhì)，以及產(chǎn)生大量sgRNAs所有必要的試劑，用于電穿孔hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (前面所述) 組份，用于進(jìn)行基因編輯后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

 Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)是一個(gè)完整的系統(tǒng)，允許通過(guò)gesicle導(dǎo)入Cas9/sgRNA復(fù)合物進(jìn)行有效的基因編輯隨后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增至48孔板。Gesicles是一種無(wú)毒的、高效的、替代電穿孔的方法，不依賴昂貴的設(shè)備或耗材。系統(tǒng)中提供所有的必要試劑用于產(chǎn)生細(xì)胞衍生的納米囊泡（稱做gesicles），來(lái)轉(zhuǎn)導(dǎo)Cas9和sgRNA至hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit（前面所述）組份，用于進(jìn)行基因編輯后的單細(xì)胞克隆形成和擴(kuò)增。單細(xì)胞克隆擴(kuò)增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

 ■ 產(chǎn)品特點(diǎn)

·在hiPSC中進(jìn)行高效的基因編輯—使用電穿孔或囊泡來(lái)遞送Cas9蛋白和sgRNA，而沒(méi)有基因組整合并且降低脫靶效應(yīng)

·優(yōu)異的單細(xì)胞存活率—編輯的hiPSC植入96孔板中的單個(gè)細(xì)胞

·編輯后和單細(xì)胞克隆期間保持多能性-hiPSC維持多能性標(biāo)記Oct-4，TRA-1-60和SSEA-4的高水平（> 90％）

·穩(wěn)定的核型從頭到尾—在編輯，單細(xì)胞克隆和擴(kuò)增過(guò)程中保持正常且穩(wěn)定的核型

·靈活地按自己的方式進(jìn)行基因編輯實(shí)驗(yàn)-選擇完整的試劑盒，該試劑盒可以使用基于電穿孔的（Code No. 632643）或基于囊泡的（Code No. 632642）CRISPR / Cas9技術(shù)提供編輯和單細(xì)胞克隆解決方案，或者在您自己的編輯實(shí)驗(yàn)后，利用培養(yǎng)基試劑盒（代碼Y30021）執(zhí)行有效的單細(xì)胞克隆

·在整個(gè)基因編輯/單細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)中繼續(xù)使用DEF-CS技術(shù)-使用Cellartis DEF-CS 500培養(yǎng)系統(tǒng)（代碼編號(hào)Y30010）在基因編輯實(shí)驗(yàn)之前和之中，然后在單細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)之后放大期間

產(chǎn)品名稱：CellArits代理 iPSC單細(xì)胞克隆培養(yǎng)基試劑盒        產(chǎn)品貨號(hào)：Y30021

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品牌       貨號(hào)       產(chǎn)品描述                                                               包裝

CellArtis  Y30010     DEF-CS 500 Culture System,DEF-CS 500培養(yǎng)系統(tǒng)，人iPS和人ES增殖用培養(yǎng)基  1套

CellArtis  Y30021     Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit           1套

CellArtis  Y40030     GS2-M小鼠 iPS/ES干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基                                     1套

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1993年，以中國(guó)的寶生物工程（大連）有限公司為中心，建立了研究用試劑的生產(chǎn)制造工廠，其中關(guān)于分子生物學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)分支的研究用試劑的制造已經(jīng)取得了ISO9001認(rèn)證，產(chǎn)品具有很高的品質(zhì)和成本競(jìng)爭(zhēng)力。
    關(guān)于研發(fā)，Takara Bio構(gòu)建了日美歐中一體的研究開發(fā)體系。利用各地特性建設(shè)開發(fā)小組，努力提升新產(chǎn)品、新服務(wù)的開發(fā)力度及開發(fā)速度，從而形成更好的產(chǎn)品更快地投入市場(chǎng)的體制。
關(guān)于銷售，通過(guò)美國(guó)、歐洲、中國(guó)、韓國(guó)及印度的子公司和Takara Bio形成了*的銷售網(wǎng)，努力提高「TaKaRa®」「Clontech®」「Cellartis®」產(chǎn)品的品牌度并擴(kuò)大產(chǎn)品銷售。
Takara Bio在引以為傲的基因工程學(xué)領(lǐng)域基礎(chǔ)上，也著手于未來(lái)有望拓展市場(chǎng)的再生醫(yī)療、細(xì)胞醫(yī)療研究領(lǐng)域的產(chǎn)品開發(fā)。在基因工程學(xué)方面，著重于擴(kuò)大PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域（Applied Field），及已處于市場(chǎng)日益增長(zhǎng)的新一代測(cè)序相關(guān)新產(chǎn)品的開發(fā)等。在再生醫(yī)療、細(xì)胞醫(yī)療研究領(lǐng)域，正不斷地進(jìn)行處于研發(fā)活躍期的iPS細(xì)胞（人工多能干細(xì)胞）及基因組編輯相關(guān)的新產(chǎn)品和新服務(wù)項(xiàng)目的開發(fā)。

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華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司-紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司：干細(xì)胞、細(xì)胞凍存、細(xì)胞治療、試劑耗材 相關(guān)板塊的產(chǎn)品，以“傳遞科學(xué)價(jià)值，服務(wù)科學(xué)研究”為宗旨，經(jīng)過(guò)近五年的努力推廣，重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司在全中國(guó)代理的BD科研產(chǎn)品、OriGen干細(xì)胞凍存袋等產(chǎn)品已經(jīng)成功銷往：上海市、北京市、重慶市、天津市、廣東省的廣州市、深圳市、珠海市、江西省的南昌市、四川省的成都市、綿陽(yáng)、浙江省的杭州市、寧波、溫州、江蘇省的南京市、蘇州、無(wú)錫、泰州、湖南省的長(zhǎng)沙、陜西省的西安市、楊凌、甘肅省的蘭州、寧夏的銀川、新疆的烏魯木齊、廣西的南寧市、山東省的濟(jì)南、青島、東北三省 遼寧省的沈陽(yáng)市、大連市、吉林省的長(zhǎng)春市、黑龍江省的哈爾濱市等中國(guó)絕大部分省市和自治區(qū)。

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