產品介紹：

　DNA無縫克隆技術是一項簡單、高效、快速將插入片段定向克隆至任意載體的任意位點的方法，本產品不依賴于T4連接酶，不受載體和目的片段酶切位點的限制，而直接使用同源重組的方法，采用特殊的酶將任意方法線性化后的載體與線性化載體兩端具有20-25 bp重疊區域的PCR片段定向重組，50℃反應5-15分鐘即可快速實現1-5個片段的定向無縫隆。

產品名稱：康為世紀 快速DNA無縫克隆預混試劑

產品貨號：CW3034M

產品相關原理：

產品組分：

額外試劑需求：

1.插入片段，特異引物，線性化載體

2.高保真PCR試劑

3.感受態細胞

4.膠回收試劑盒

5.PCR儀，PCR反應管等。

使用前準備:

插入片段的制備與回收

插入片段的制備可用任意PCR酶擴增，克隆過程不受擴增產物平末端或粘末端（A尾）的影響（重組過程中將被去除，在最終克隆產物中不會出現），但為了減少擴增突變，特別是點突變實驗中，建議使用高保真聚合酶（CW2965 Super Pfx Master Mix）進行擴增。

一般情況下，PCR產物推薦膠回收純化以降低背景比例，如果插入片段來源于質粒模板，且該質粒與重組載體具有相同抗性，需用內切酶Dpn I消化PCR產物，以降低背景，提高陽性率。

相關使用說明：

1.重組產物轉化

克隆感受態置于冰上解凍，取10ul反應產物加入100 ul感受態細胞中，輕彈管壁混勻，冰上靜置30分鐘。

42℃水浴熱激90秒，立即置于冰上2-3分鐘。

加入600 ul無抗LB液體培養基，37℃搖床220 rpm培養30分鐘。

5000 rpm離心5分鐘，棄多余培養液，剩余100 ul菌液重懸菌體，用無菌涂布棒

均勻涂布在正確抗性的平板上。

37℃培養箱倒置培養12-16小時。

2.陽性克隆的鑒定

可根據具體情況，選擇菌落PCR鑒定、提取質粒進行限制性內切酶鑒定或測序鑒定。

保存條件：-20℃，保質期一年。

產品訂購信息：

品牌             貨號                   名稱                                                     規格

康為世紀  CW2020M  HiFiScript gDNA Removal RT MasterMix   100 rxns

產品名稱：康為世紀 快速DNA無縫克隆預混試劑

產品貨號：CW3034M

關于公司：

康為世紀是主要從事高附加值、高技術含量的生物試劑的研發與生產，為生命科學研究、基因檢測和體外診斷用戶提供創新型生物產品和服務。康為世紀建立了專業化、集約化、能夠形成自主知識產權的技術創新體系和開放式的合作創新平臺，構建成了公司完整的研發創新體系。

紅榮微再——助力分子診斷新未來

紅榮微再作為RNA、NGS、ctDNA、qPCR的分子診斷專業供應商，以“傳遞科學價值，服務科學研究"為宗旨,努力為客戶提供質量可靠、貨美價優的分子診斷試劑耗材，與客戶攜手為中國分子診斷的發展而前行。